微生物培养条件及生物消泡剂

发布时间:2012-11-27 15:52:34

1.pH值:同一菌种产酶的类型与酶系组成可以随pH的改变而产生不同程度的变化。 如用黑曲霉合成柚苷酶时,培养在PH6.0以上的环境中柚苷酶活性高,果胶酶活性受到抑制,pH改变到6.0以下就形成果胶酶。pH与生物消泡剂还决定酶系的组成,泡盛曲霉突变株在pH6.0培养时,以产生ɑ-淀粉酶为主,糖化型淀粉酶与麦芽糖酶产生极少,在pH2.4条件下培养,转向糖化型淀粉酶与麦芽糖酶的合成,ɑ-淀粉酶的合成受到抑制。 在蛋白酶生产中,pH低有利于酸性蛋白酶生成,pH高有利于中性和碱性蛋白酶生成,这是相一致的。产酶pH值常同酶反应最适pH值接近,但酶反应的最适pH也许对某些酶最不稳定,在这种场合下只能在生物消泡剂中选择尽量靠近的pH值。 在有些情况下,由于pH不同,出现胞内和胞外酶的产量比例不同,如ɑ-半乳糖苷酶在pH4.8-6.0范围内,其胞内酶占74%。当pH升高时胞外酶的比例就升高。 2.温度:温度对产酶的影响有以下几种情况: (1)产酶温度低于生长温度。酱油曲霉蛋白酶合成的适宜温度在28℃,比生长温度40℃条件下产酶量高出2-4倍。在生物消泡剂与异淀粉酶生产中也有这种情况。生长温度采用30℃,而产酶温度降至26℃时,酶活最高(489 U/ml)。 (2)产酶温度与生长温度一致。如链霉菌合成葡萄糖异构酶约在30℃。 (3)产酶温度高于生长温度。例如,产生糖化型淀粉酶的适宜温度在35℃,而它生长的最适温度为30℃。链霉菌产生淀粉酶的温度以35℃合适,而生长温度则以28℃最好。 此外,温度与生物消泡剂还能影响酶系组成及酶的特性。例如,用米曲霉制曲时,温度控制在低限,有利于蛋白酶合成,而ɑ-淀粉酶活性受到抑制。 3.通气和搅拌:以枯草杆菌产生ɑ-淀粉酶为例。 将细菌的生理时期划分为三个阶段:①菌体繁殖期,接种后5-13 h;②芽孢产生期;③产酶期。这三个阶段对于供氧要求是不同的。如果第二时期维持缺氧状态,有助于抑制芽孢形成,第一和第三生理时期充分供氧与生物消泡剂,可以促进菌体繁殖并提高产酶量,证明不同时期,对通气量要求不同。 对于产异淀粉酶的气杆菌,不同的通气量、生物消泡剂和培养方式,酶活亦有很大差别。产异淀粉酶的气杆菌,生长期间要求有较大的通气量,而产酶朝间通气量以小为好;就生长而论,生物消泡剂与通气以中等程度较好。也有与此相反的情况,如蛋白酶深层发酵时,较小通气量有利于生长,不利于产酶,较大通风量可促进酶的合成而对生长则抑制。但异构酶产生菌因菌种不同,有的在强通风下产酶,有的需弱通风下产酶。 4.种龄:过老或过嫩,不但延长发酵周期,而且会降低产酶量。接种比1:10,振荡培养50 h后测定培养液蛋白酶活性。 本文参考《发酵微生物学》一书。
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