丙酮丁醇菌消泡剂种母的制备
发布时间:2012-07-14 10:44:58
在发酵行业运用消泡剂是必须的，而丙酮丁醇菌的分离与纯化同样需要丙酮丁醇菌消泡剂的协助，达到理想的效果。
一、丙酮丁醇菌的分离与纯化方法
在土壤、细泥、粪便中及新鲜果实、蔬菜的表面上，均有丙酮丁醇菌存在。利用它的孢子的嫌气性和耐热性，并配合使用丙酮丁醇菌消泡剂，可以采用热淘汰法和单细胞分离法，以获得优良的菌种。由于丙酮、丁醇发酵时，易受杂菌侵染而导致酸败，所以，丙酮丁醇工厂必须经常进行菌种的分离与纯化工作，以保证正常生产。
所谓热淘汰法，即将含有丙酮丁醇菌的试样接入5%的玉米醪试管内，再放在沸水浴中1-1.5 min，杀死不耐热的杂菌和热抵抗力较差的孢子，而保留对热抵抗力较强的丙酮丁醇菌孢子，然后在嫌气状态下培养。培养液产生大量气体，醪盖上升，这时可转接到新鲜培养基试管内，同法进行热淘汰和嫌气培养，如此反复多次，即可获得较好的菌株。欲获得纯培养或者需从发酵醪中选取优良菌株，可用嫌气平板进行单菌落分离。如用有明胶或碳酸钙的培养基，则可能出现溶解圈。然后接入玉米醪中测定气体产生量，醪盖上升情况和丙酮产量。获得的优良菌种用沙土管保存。
二、丙酮丁醇菌扩大培养
丙酮丁醇菌通过丙酮丁醇菌消泡剂进行扩大培养，可以得到优良的丙酮丁醇菌种。沙土孢子—试管—种子瓶—第一种母罐—第二种母罐—发酵罐。
1．试管菌种的培养：选取优良菌种的砂土孢子1-2g，接入10ml5%浓度的玉米醪与丙酮丁醇菌消泡剂中，并将此管在100℃沸水中热处理1-2 min，急速冷却至37℃，然后置于真空干燥器内进行培养（2 666 Pa以下温度保持在37-39℃）。
2．种母瓶培养：将一支试管菌种接种到盛有5%浓度的玉米醪液的种母瓶中，在常压下培养24h，即可接入第一种母瓶。一般丙酮丁醇菌孢子萌发时，要求嫌气条件较高，营养体繁殖时，由于本身产生的H2和CO2与添加的丙酮丁醇菌消泡剂已能满足嫌气条件。
3．第一种母罐：其中盛有6%浓度的玉米醪接入种母瓶的醪液，培养12-15h后，即可接入第二种母罐。
4．第二种母罐：其中盛有8%浓度的玉米醪，接入第一种母罐醪液，培养20 h左右，然后将总量1／3～1/2送入发酵罐。
制备种醪的方法有间歇调制种醪法，半连续调制种醪法，利用部分发酵醪制种醪法。本文参考《发酵微生物学》一书。
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