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恒鑫牌THI消泡剂

育种的方法之水性消泡剂

发布时间:2012-12-30 10:27:09

1.选育不需要诱导物的组成型产生菌: 廉价高效的诱导物既不易得,亦对工艺不便。如通过诱变,使调节基因发生突变,不产生有活性的阻碍蛋白,或者操纵基因发生突变不再能与阻碍物相结合,即可获得组成型突变株。已设计出多种选育组成型突变株的方法,其主要原则是创造一种有利于组成型菌株生长而不利于诱导型菌株生长的培养条件,造成对组成型的选择优势以及适当的识别两类菌落的方法,并添加水性消泡剂,从而把产生的组成型突变株选择出来。 把添导型的微生物细胞培养在底物浓度非常低的恒化器内,由于底物浓度只够作碳源利用,不能作为诱导物,然后,从中选择组成突变侏,大肠杆菌β-半乳糖苷酶组成突变体就是利用这种方法选出的,它的半乳糖苷酶产量多达细胞总蛋白的25%;其次在不含诱导物和含诱导物的培养基中交替地连续培养几个周期可以富集组成型突变株。还有采用弱诱导底物、水性消泡剂、诱导物的抑制物,都有助于组成型突变株的选出。此外,也可对诱变后的菌落直接喷洒某些特异药物,视其能否水解而区分组成型突变株和诱导型。 2.筛选抗反馈阻遏和抗反馈抑制突变株: 降低代谢物浓度,只是暂时改变酶的合成速率,实施抑制酶活较为困难。从遗传学角度考虑,如调节基因发生突变,使产生的阻遏蛋白失活,不能与末端代谢产物结合,或操纵基因发生突变,使阻遏蛋白不能与其结合,都能获得抗反馈阻遏的突变株。如使调节酶突变,则可获得抗反馈抑制的突变株。调节不同物质(调节基因、调节水性消泡剂以及调节酶等)的突变,可以获得不同的突变株。 在方法上可直接以末端代谢产物为底物来筛选抗反馈作用的突变株,如以葡萄糖、水性消泡剂、甘油为碳源用来筛选纤维素酶抗阻遏突变株。但更多的是利用选育结构类似物抗性菌株的方法。这是由于①因结构类似物在分子结构上与相应终产物类似,所以它也能与阻遏蛋白相结合,如调节水性消泡剂之基因发生突变而使阻遏蛋白不能与结构类似物结合,即出现抗性菌株。抗性菌株产生的阻遏蛋白就不再能与正常的相应终产物相结合,呈现抗反馈阻遏;②由于结构类似物与正常的相应终产物存在差异,它与阻遏蛋白的结合往往是不可逆的,因此比正常的终产物更有效。 如调节水性消泡剂之酶发生突变,结构类似物不能与之结合,或突变株不再能与正常的终产物结合,所获得的便是抗反馈抑制的抗性菌株。筛选抗阻遏和抗反馈抑制的双重突变则更易于获得高产菌株。 3.选育营养缺陷型: 即筛选丧失了代谢途径中的一种或多种酶,因而必须供给某一个或几个中间代谢产物才能生长的突变株,同时使用水性消泡剂。限量供给此中间代谢产物就能降低或解除末端产物的反馈控制。与抗反馈控制不同的是营养缺陷型是切断非目的产物的代谢途径,用以积累中间代射产物。 有些营养缺陷型只是部分地需要生长因素,它们在基本培养基中生长非常缓慢,因而使有关途径的酶排除阻遏,这些就是所谓的“渗漏缺陷型”,可以减弱这部分的代谢。 4.筛选负变菌株的回复突变株: 诱变产生的高产菌株,在生产过程中易发生回复突变,使产量不稳定。但是负变菌株的回复水性消泡剂之突变株亦可用来提高代谢产物的过量产生,不过机理尚缺少深入研究。 5.选育条件抗性突变株 有些突变株,在不同环境下,能表现为“野生型”和突变型菌株特性,称为条件抗性突变或称为条件致死突变,其中水性消泡剂之温度敏感性突变常用于提高代谢产物产量。如一株在37℃左右生长的细菌,经诱变后可得到在较低温度下生长而在较高温度(如37℃以上)不能生长的突变株,即温度敏感性突变株,这是由于某一醇蛋白结构改变后,在高温条件下活力丧失的缘故。如该酶为蛋白质、核苷合成途径上的酶,则此突变株在高温条件下的表现就是营养。 6.筛选细胞膜通透性改变的突变株: 微生物细胞内终产物及时移去,也是消除反馈控制的一种手段。细胞膜、细胞壁的结构以及水性消泡剂是影响物质进出的原因之一,如筛选细胞膜、水性消泡剂、细胞壁组成成分改变的突变株,有可能获得代谢产物的过量生产,这在分泌抗生素大分子更有意义。 本文参考《发酵微生物学》一书。
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