甲醇与乙醇蛋白的制备
发布时间:2013-05-16 15:57:21
石油蛋白是第一代的单细胞蛋白也称正烷烃蛋白。由于正烷烃蛋白精制复杂,残留物不易清洗,尽管有些产品没有残留,也做过长期动物饲养,但致癌的苯并芘等,仍然使人担心,还有其它社会、政治、经济等原因,限制了石油蛋白的发展。
自从合成法甲醇、乙醇大量生产后,逐渐发展了甲醇和乙醇蛋白,因为乙醇、甲醇溶于水,可以从天然气、石油化工厂裂解尾气及煤灰中廉价地制取,每2t甲醇即可生产1t甲醇蛋白粉。目前世界上产甲醇已达每年1000万t,而正烷烃则为200万t,人们都称甲醇蛋白为第二代单细胞蛋白。
通过饲养试验证明,甲醇蛋白作为动物饲料,具有很高的营养价值,它除了含有大量的蛋白质、氨基酸的组成也比较平衡外,还含有丰富的B族维生素。甲醇利用性微生物的分离方法,以富集培养较多,即以含有无机盐、维生素的液体合成培养基,添加1%左右的甲醇。然后接入分离的样品,于30-38℃培养1-7日,重复如此培养5-6次,最后从纯化的平板上分离。分离的样品以选择土壤的机会较大。如在合成培养基上另添加维生素B12时,甲醇醇母被分离出的频率较高。
甲醇利用性微生物的培养,除甲醇作为碳源外,与一般微生物一样,尚需添加铵盐、磷酸盐、各种金属及维生素、氨蛙酸或酵母抽提物等生长因子。甲醇利用性微生物对生长因子的要求:例如,Kloeckera要求硫胺索,Candida及Saccharomyces要求生物素;Torulopsis要求硫胺索及生物素。而Pseudomonas等不需提供生长因子,只要在甲醇及无机盐的简单培养基上即可生长。
培养温度:以甲醇为碳源培养时,酵母培养最适温度以30℃较多。以甲醇为惟一碳源的细菌菌株,以38-42℃为多,还有要求50℃以上的高温菌种。
甲醇浓度:一般而言甲醇对微生物有害,虽是能利用甲醇的微生物,浓度过高也会阻碍生长,一般酵母在0.2%-3.2%较适宜,而以0.2%的增殖速度最大。Haggstrom认为甲醇利用细菌以1-2ml/L的甲醇浓度,倍增时间最短,约1.32 h。
由于甲醇浓度不能太高,当大规模培养时,可采用自动控制设备来维持最适浓度的甲醇,常用的办法有:溶解氧(DO)信号的流加法 依据Monod的生长式,当Ks值较小时,培养基中基质完全耗尽,同时酶的消费中断,其结果培养系统供氧太多,DO急升,此时溶解氧信号迅速推动基质流加。
一般甲醇利用菌对甲醇消费的DO信号是敏感的,有些菌的高浓度菌体对25 mg/L以上的甲醇有感应,而对10 mg/L无感应,于是可以此浓度进行DO信号控制。此法的缺点是由于基质屡呈饥饿状,尤以高浓度菌体为然,甲醇的添加次数频繁,微生物的正常代谢受到干扰。
依pH恒定器的流加法:调节甲醇与氨混合液的C/N比率后,此混合液既可用以调节pH,同时又可供给甲醇。有一菌用甲醇(纯度99%)与氨(29%)的比率为100:23 (V/V)的混合液来控制pH值。不同菌和不同条件可以调节甲醇与氨的混合比率。
本文参考《发酵微生物学》一书。
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